范圍

　　本方法規(guī)定了化妝品中4-氨基聯(lián)苯及其鹽的液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

　　本方法適用于化妝品中4-氨基聯(lián)苯及其鹽的測定，其檢測限為1.0µg/kg，定量限為3.3µg/kg。

　　方法提要

　　樣品中禁用芳香胺4-氨基聯(lián)苯及其鹽，通過超聲提取，液液萃取及固相萃取小柱凈化并濃縮后，用適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑定容，經(jīng)液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜測定，以內(nèi)標(biāo)法定量。

　　試劑與材料

　　甲醇：色譜純。

　　乙腈：色譜純。

　　甲酸：色譜純。

　　正己烷：分析純。

　　乙醚：分析純。

　　氯化鈉飽和溶液。

　　HLB固相萃取小柱或相當(dāng)者：500mg/6mL。

　　30%甲醇水溶液：甲醇(3.1) 水=30 70。

　　氨水：NH3含量25%～28%。

　　5%氨水甲醇溶液：氨水(3.9) 甲醇=5 95，現(xiàn)配現(xiàn)用。

　　4-氨基聯(lián)苯：CAS92-67-1，純度>99%。

　　4-氨基聯(lián)苯-D9：CAS344298-96-0，純度>99%。

　　4-氨基聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)貯備液(1000µg/mL)：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10.0mg，用甲醇溶解,稀釋，定容至10mL，于-18℃下保存。

　　4-氨基聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別取(3.13)標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用甲醇稀釋定容，制成濃度為1000ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，于-18℃下保存。臨用時用50%甲醇水溶液稀釋成500ng/mL、250ng/mL、125ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、5ng/mL。

　　4-氨基聯(lián)苯-D9內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液：用50%甲醇稀釋內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品溶液，得到100ng/mL4-氨基聯(lián)苯-D9內(nèi)標(biāo)溶液。

　　分別從4-氨基聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(3.14)中分別吸取0.5mL溶液與0.5mL100ng/mL內(nèi)標(biāo)溶液(3.15)混合，制得內(nèi)標(biāo)4-氨基聯(lián)苯-D9濃度為50ng/mL，4-氨基聯(lián)苯分別為250ng/mL、125ng/mL、62.5ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、2.5ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。并根據(jù)需要配制成相應(yīng)濃度的空白基質(zhì)加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

　　儀器

　　液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測器(配ESI離子源)。

　　分析天平：感量0.1mg。

　　渦旋混合器。

　　離心機：轉(zhuǎn)速10000r/min,容量為10mL。

　　樣品過濾器：0.2μmPTFE濾膜或相當(dāng)者。

　　分析步驟

　　5.1化妝水、面霜、粉底類化妝品

　　稱取樣品0.2g(精確到0.001g)，置于10mL具塞塑料離心管中，加入1mL濃度為100ng/mL氘同位素標(biāo)記的4-氨基聯(lián)苯(3.15),再加入3mL氯化鈉飽和溶液(3.6)，于渦旋混合器上使樣品分散，加入3mL乙腈(3.2)，充分渦旋，并超聲提取30min，10000r/min離心10min，吸出上層清液于另一10mL具塞塑料離心管中，下層氯化鈉飽和溶液用3mL乙腈(3.2)重復(fù)提取步驟一次，合并兩次乙腈提取液，往提取液中加入正己烷(3.4)2mL，渦旋離心，靜置分層，棄去上層正己烷溶液，再在乙腈層加入正己烷(3.4)2mL，渦旋離心，靜置分層，棄去上層正己烷溶液，轉(zhuǎn)移下層乙腈溶液至另一10mL玻璃刻度試管中，40℃水浴下用氮氣吹至近干，并用30%甲醇水溶液(3.8)重新溶解、定容至2mL，并經(jīng)0.2μm濾膜過濾后作為測定液上機測定。

　　5.2洗面奶、沐浴液類化妝品

　　稱取樣品0.2g(精確到0.001g)，置于10mL具塞塑料離心管中，加入1mL濃度為100ng/mL氘同位素標(biāo)記的4-氨基聯(lián)苯(3.15),再加入3mL氯化鈉飽和溶液(3.6)，于渦旋混合器上使樣品分散，加入3mL乙醚(3.5)，充分渦旋，并超聲提取30min，10000r/min離心10min，吸出上層清液于另一10mL具塞塑料離心管中，下層氯化鈉飽和溶液用3mL乙醚(3.5)重復(fù)提取步驟一次，合并兩次乙醚提取液，用氮氣吹至近干，并用30%甲醇水溶液(3.8)2mL重新溶解，再加入8mL純水稀釋。

　　HLB固相萃取小柱(3.7)，接上固相萃取裝置，小柱預(yù)先用10mL甲醇、10mL水進(jìn)行活化、平衡。將待凈化的樣品溶液傾倒入固相萃取小柱，待樣品溶液自然流盡后，依次用10mL純水、5mL10%甲醇溶液淋洗小柱;待淋洗液自然流盡后，用吸球吹出小柱中的殘留液，用10mL5%氨水甲醇溶液(3.10)洗脫固相萃取小柱，收集洗脫液，40℃水浴下經(jīng)氮氣吹至近干，用30%甲醇水溶液(3.8)重新溶解、定容至2mL，并經(jīng)0.2μm濾膜過濾后作為測定液上機測定。

　　5.3指甲油與口紅類化妝品

　　稱取樣品0.2g(精確到0.001g)，置于10mL具塞塑料離心管中，加入1mL濃度為100ng/mL氘同位素標(biāo)記的4-氨基聯(lián)苯(3.15),再加入3mL乙腈(3.2)，于渦旋混合器上使樣品分散溶解，充分渦旋，并超聲提取30min，10000r/min離心10min，取上層清液于另一10mL具塞塑料離心管中，下層樣品殘渣再用3mL乙腈(3.2)重復(fù)提取步驟一次，合并兩次乙腈提取液，往提取液中加入正己烷(3.4)2mL，渦旋離心，靜置分層，棄去上層正己烷溶液，再在乙腈層加入正己烷2mL，渦旋離心，靜置分層，棄去上層正己烷溶液，轉(zhuǎn)移下層乙腈溶液至另一10mL玻璃刻度試管中，40℃水浴下用氮氣吹至近干，并用30%甲醇水溶液重新溶解、定容至2mL，并經(jīng)0.2μm濾膜過濾后作為測定液上機測定。

　　測定

　　液相色譜參考條件

　　以下為液相色譜參考條件：

　　色譜柱：C18，1.7：相，100mm2.1mm(內(nèi)徑)，或相當(dāng)者

　　柱溫：40℃;

　　流動相：0.3%甲酸水溶液 乙腈=75 25

　　洗脫程序：等度;

　　流速：0.5mL/min;

　　進(jìn)樣量：2μL;

　　質(zhì)譜參考條件

　　以下為質(zhì)譜參考條件：

　　電離源模式：電噴霧離子化;

　　電離源極性：正離子模式;

　　霧化氣：氮氣;

　　霧化氣壓力：45psi;

　　毛細(xì)管電壓：3500V;

　　干燥氣溫度：325℃;

　　干燥氣流速：5L/min;

　　鞘氣溫度：400℃;

　　鞘氣流速：12L/min;

　　監(jiān)測方法：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)

　　分辨率：Q1(unit)Q3(unit);

　　質(zhì)譜測定參數(shù)見表1;質(zhì)譜鑒定的允差見表2。

　　表1　4-氨基聯(lián)苯及其內(nèi)標(biāo)物的保留時間、監(jiān)測離子對、源內(nèi)裂解電壓、碰撞氣能量

　　分析物保留時間

　　/min母離子子離子源內(nèi)裂解電壓(V)碰撞氣能量(V)

　　4-氨基聯(lián)苯-D91.069179*15915033

　　4-氨基聯(lián)苯1.139170.1*1527530

　　937530

　　注1：*定量離子

　　表2　定性確定時相對離子豐度的最大允許偏差

　　相對離子豐度/%>50>20～50>10～20≤10

　　允許的相對偏差/%±20±25±30±50

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

　　以空白基質(zhì)加標(biāo)峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值為縱坐標(biāo)，空白基質(zhì)加標(biāo)濃度與內(nèi)標(biāo)物濃度的比值為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　計算

　　試樣中4-氨基聯(lián)苯的含量，按式(1)計算

　　w=………….………………………….(1)

　　式中:

　　w——試樣中4-氨基聯(lián)苯及其鹽的含量，以4-氨基聯(lián)苯計，單位為微克每千克(µg/kg);

　　ρ——4-氨基聯(lián)苯氘代同位素內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);

　　R——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出測試溶液中4-氨基聯(lián)苯與同位素內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度比值;

　　V——樣品定容體積，單位為毫升(mL);

　　m——樣品的質(zhì)量，單位為克(g)。

　　8精密度

　　在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不大于這兩次測定值的算術(shù)平均值的10%。

　　9色譜圖與質(zhì)譜圖

　　圖1：純標(biāo)樣(4-氨基聯(lián)苯、4-氨基聯(lián)苯-D9)多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)分析提取離子流圖

　　1.4-氨基聯(lián)苯-D9(1.069min);2.4-氨基聯(lián)苯(1.139min)

　　圖2：4-氨基聯(lián)苯及其內(nèi)標(biāo)4-氨基聯(lián)苯-D9的子離子掃描質(zhì)譜圖