測(cè)定法測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)±2nm以內(nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)±2nm以內(nèi);否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)巍⒓兌纫约皟x器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度，并以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.3～0.7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸收度會(huì)偏低;狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)，由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。用作鑒別和檢查項(xiàng)目的方法，分別按各品種項(xiàng)下的方法進(jìn)行。鑒別項(xiàng)下吸收度讀數(shù)的范圍可根據(jù)配制供試液時(shí)的準(zhǔn)確度及制劑的實(shí)際含量確定。紫外分光光度計(jì)用于含量測(cè)定的方法一般有以下幾種。

　　(1)對(duì)照品比較法

　　按各品種項(xiàng)下的方法，分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分標(biāo)示量的100±10%，所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度后，按下式計(jì)算供試品中被測(cè)溶液的濃度： Cx=(Ax/Ar)Cr 式中 Cx為供試品溶液的濃度;

　　Ax為供試品溶液的吸收度;

　　Cr為對(duì)照品溶液的濃度;

　　Ar為對(duì)照品溶液的吸收度。

　　(2)吸收系數(shù)法按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測(cè)定時(shí)，應(yīng)注意儀器的校正和檢定。

　　(3)計(jì)算分光光度法采用計(jì)算分光光度法應(yīng)慎重。本法有多種，使用時(shí)均應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測(cè)定時(shí)，影響精度的因素較多，故對(duì)照品和供試品測(cè)試條件應(yīng)盡可能一致。若測(cè)定時(shí)不用對(duì)照品，如維生素A測(cè)定法，則應(yīng)在測(cè)定時(shí)對(duì)紫外分光光度計(jì)作仔細(xì)的校正和檢定。紫外分光光度計(jì)波長(zhǎng)有變動(dòng)：儀器的校正和檢定由于溫度變化對(duì)機(jī)械部分的影響，儀器的波長(zhǎng)經(jīng)常會(huì)略有變動(dòng)，因此除應(yīng)定期對(duì)所用的儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應(yīng)于測(cè)定前校正測(cè)定波長(zhǎng)。常用汞燈中的較強(qiáng)譜線237.83、253.65、275.28、296.73、313.16、334.15、365.02、404.66、435.83、546.07與576.96nm;或用儀器中氘燈的486.02與656.10nm譜線進(jìn)行校正;鈥玻璃在279.4、287.5、333.7、360.9、418.5、460.0、484.5、536.2與637.5nm波長(zhǎng)處有尖銳吸收峰，也可作波長(zhǎng)校正用，但因來源不同會(huì)有微小的差別，使用時(shí)應(yīng)注意。吸收度的準(zhǔn)確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，按下表規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定并計(jì)算其吸收系數(shù)。規(guī)定的吸收系數(shù)如下表，相對(duì)偏差可在±1%以內(nèi)。

　　波長(zhǎng)(nm) 235(最小) 257(最大) 313(最小) 350(最大)

　　吸收系數(shù)E1% 1cm 124.5 144.0 48.62 106.6

　　雜散光的檢查可按下表的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在下表規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定。

　　試劑 濃度%(g/ml) 測(cè)定用波長(zhǎng)(nm) 透光率(%)

　　碘化納 1.00 220 <0.8

　　亞硝酸鈉 5.00 380 <0.8

　　在一定范圍內(nèi)測(cè)定：紫外分光光度計(jì)對(duì)溶劑的要求測(cè)定供試品前，應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長(zhǎng)附近是否符合要求;即用1cm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白(即空白光路中不置任何物質(zhì))測(cè)定其吸收度，溶劑和吸收池的吸收度，在220～240nm范圍內(nèi)不得超過0.40;在241～250nm范圍內(nèi)不得超過0.20;在251～300nm范圍內(nèi)不得超過0.10，在300nm以上時(shí)不得超過0.05。