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RT-PCR、Western blot和ELISA三者的區(qū)別

[2015/11/9]

  PCR是從轉(zhuǎn)錄水平上檢測(cè)目的基因,而非蛋白,從轉(zhuǎn)錄到翻譯還有復(fù)雜的過(guò)程,因此基因的表達(dá)量與蛋白的表達(dá)量不一定是正相關(guān)的。
  WB只能半定量,但是可以檢測(cè)細(xì)胞膜蛋白,這點(diǎn)ELISA做不到。
  ELISA可用定量方法檢測(cè)蛋白也就是說(shuō)你可以觀察不同濃度刺激物對(duì)目的蛋白的影響。
  基因翻譯蛋白質(zhì)PCR可以檢測(cè)基因的表達(dá)量,絕對(duì)定量和相對(duì)定量。但基因翻譯表達(dá)蛋白質(zhì)是個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,有可能出現(xiàn)基因量大而蛋白質(zhì)少,或者相反,甚至其他情況。所以,PCR是從基因?qū)用?/FONT>DNAmRNA進(jìn)行的檢測(cè),而Western Blot是目前一種結(jié)合內(nèi)參對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行半定量的方法,Elisa可以定量檢測(cè)某些蛋白、激素等。

  一、目的
  雖然兩者都是通過(guò)抗原抗體反應(yīng)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè),WB主要還是定性,Elisa可以定性,也可以定量。
  WB所檢測(cè)的一般是抗原,而Elisa抗原抗體都可以檢測(cè)。
  WB所檢測(cè)的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚體、降解產(chǎn)物等,一句話,WB可以確定所用抗體是與那種蛋白起作用的;而Elisa無(wú)能為力,一鍋端了。

  二、模式
  WB是(抗原-抗體-二抗酶)模式進(jìn)行檢測(cè);Elisa模式有多種,如(抗原-抗體-二抗酶)、(抗原-抗體-抗原酶)、(抗抗體-抗體-抗原酶)、(抗體-抗原-抗體酶)、(抗抗體-抗體-抗原-抗體酶)等等很多很多。

  三、抗體的適用性
  WB所適用的一抗一般是線性位點(diǎn)的,ELISA線性或構(gòu)象型抗體都可以使用。從另一個(gè)意義上講,WB可以做抗體是線性位點(diǎn)還是構(gòu)象型位點(diǎn)的補(bǔ)充判定,而Elisa不行。

  四、靈敏度
  一般Elisa的靈敏度要遠(yuǎn)高于WB,這從一般酶標(biāo)記物的使用濃度或待檢樣品的稀釋度上就可以看出。

  五、可操作性
  WB一次處理量就是一塊膠版,10-20個(gè)樣品最多了。Elisa一塊96孔板一次可以處理96個(gè)樣本,可以設(shè)置多個(gè)復(fù)孔、對(duì)照、梯度樣等來(lái)提高檢測(cè)的可信度。
  WB操作常見(jiàn)的非特異性條帶,膜本底差,顯色不好等等缺點(diǎn)在Elisa上表現(xiàn)得要好得多。

  六、商品化度
  WB不管怎樣,都要自己先做電泳。而Elisa有很多成熟的商品化試劑盒了,只要不怕花錢,檢測(cè)要方便快捷得多。 


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